常見的李斯特菌快速檢測(cè)技術(shù)

李斯特菌快速檢測(cè)方法為增菌以后，生化鑒定之前，對(duì)樣本進(jìn)行快速篩選，以縮小檢測(cè)范圍，減少檢測(cè)任務(wù)，提高檢測(cè)效率。常見的李斯特菌快速技術(shù)有：

 

1即用培養(yǎng)技術(shù)

即用培養(yǎng)基技術(shù)則省掉了前期準(zhǔn)備工作，可以直接檢測(cè)樣品，從而節(jié)約了大量人力成本。目前，商業(yè)化的固定培養(yǎng)基技術(shù)主要有兩種：紙片法和即用平皿法。紙片法是指將顯色培養(yǎng)基固定于紙片上，上方再蓋一層帶有方格的透明薄膜，以方便計(jì)數(shù)。即用平皿法是指用已倒有培養(yǎng)基的平皿，接種操作與傳統(tǒng)涂板、劃線法一樣。其優(yōu)點(diǎn)和紙片法一樣，即省掉了前期準(zhǔn)備工作，可以直接接種培養(yǎng)。此類產(chǎn)品主要有3*的Petrifilm試紙片、**生物的MicroFast®測(cè)試片、北京**的Easy test 系列產(chǎn)品及**生化的微生物測(cè)試片等，已被許多研究被證明與傳統(tǒng)方法的檢測(cè)結(jié)果無顯著性差別。

 

2免疫學(xué)檢測(cè)法

該技術(shù)以抗原抗體免疫為基礎(chǔ)，制備特異性克隆抗體檢測(cè)細(xì)菌。目前國(guó)內(nèi)外李斯特菌快速檢測(cè)的此類技術(shù)主要包括：酶聯(lián)熒光分析法(ELFA)、金標(biāo)免疫層析技術(shù)、流式細(xì)胞技術(shù)等。

 

2.1酶聯(lián)熒光分析法(ELFA)

該方法是將李斯特菌抗原與單克隆抗體相結(jié)合，然后再將結(jié)合有堿性磷酸酶的抗體與李斯特菌抗原結(jié)合。通過檢測(cè)熒光強(qiáng)度（熒光強(qiáng)度與抗原含量成正比）可推算出樣品中李斯特菌的數(shù)量。ELFA 靈敏度比ELISA 高，并省去了ELISA 中的顏色反應(yīng)，縮短反應(yīng)時(shí)間；但缺點(diǎn)是成本較高，目前主要應(yīng)用在自動(dòng)酶聯(lián)熒光免疫檢測(cè)系統(tǒng)(VIDAS)上。

 

2.2金標(biāo)免疫層析技術(shù)

該技術(shù)的原理是將高度特異性抗單增李斯特菌抗原的抗體束縛在色原載體上，且可與固相支撐基質(zhì)相分離。當(dāng)檢測(cè)樣品中存在李斯特菌時(shí)，測(cè)試單元的試劑將會(huì)被展開，產(chǎn)生肉眼可見的確定性反應(yīng)。陽(yáng)性結(jié)果會(huì)在試紙窗有一指示陽(yáng)性的檢測(cè)線，有效測(cè)試還需要進(jìn)一步確認(rèn)控制線的存在，若無此線檢測(cè)無效。

 

3流式細(xì)胞術(shù)

流式細(xì)胞術(shù)是一種在功能水平上對(duì)單細(xì)胞或其他生物粒子進(jìn)行定量分析和分選的檢測(cè)手段，它可以高速分析上萬個(gè)細(xì)胞，并能同時(shí)從一個(gè)細(xì)胞中測(cè)得多個(gè)參數(shù)。流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)微生物主要是基于單個(gè)細(xì)胞的熒光標(biāo)記技術(shù)，可對(duì)樣品中死活菌總數(shù)、活菌數(shù)或特定細(xì)菌進(jìn)行定量檢測(cè)。該檢測(cè)技術(shù)平均1min 即可得到檢測(cè)結(jié)果，無需培養(yǎng)和樣品制備，靈敏度可以達(dá)到1～100CFU，但儀器投入較大，檢測(cè)成本相對(duì)較高，對(duì)樣本的要求高，嚴(yán)重的制約這該技術(shù)在食品微生物檢測(cè)中的應(yīng)用。

 

4分子學(xué)檢測(cè)方法

分子生物學(xué)檢測(cè)方法主要包括核酸探針雜交技術(shù)、PCR 檢測(cè)技術(shù)等。

4.1 DNA探針檢測(cè)技術(shù)

DNA 探針法是將2 條堿基互補(bǔ)的DNA 鏈在適當(dāng)?shù)臈l件下雜交，通過檢測(cè)樣品與標(biāo)記性DNA 探針之間形成的雜交分子來檢測(cè)樣品中的單增李斯特菌，測(cè)定放射性或熒光強(qiáng)度即可得出樣品中單增李斯特菌的個(gè)數(shù)[8]。隨著探針技術(shù)的逐漸成熟，人們將多個(gè)DNA 特異性探針固定到芯片上，制成基因芯片，采用熒光標(biāo)記法提高檢測(cè)靈敏度。該技術(shù)可同時(shí)用于多種不同種類病原菌或毒素的檢測(cè)，減少實(shí)驗(yàn)次數(shù)，減小工作量。

4.2 PCR 檢測(cè)技術(shù)

PCR 是近年來廣泛應(yīng)用的分子生物學(xué)檢測(cè)方法，在單增李斯特菌的檢測(cè)中以其遺傳物質(zhì)高度保守的核酸序列（常用的靶序列包括hly、actA、prfA等）設(shè)計(jì)引物進(jìn)行擴(kuò)增。該方法特異性好，但靈敏度低，對(duì)樣品進(jìn)行前處理后再進(jìn)行擴(kuò)增，可以提高檢出率和檢測(cè)靈敏度。PCR 技術(shù)還可對(duì)單增李斯特菌進(jìn)行定量檢測(cè)。

 



 

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